Julia Stiles mengawali karir dari pangung theather, setelah kemudian memasuki film layar Televisi, layar lebar dan model. Akting terkenalnya saat memerankan karakter Katarina Stratford dalam film komedi romantis, 10 THINGS I HATE ABOUT YOU (1999).

Sementara film-film terkenalnya di antaranya, I LOVE YOU, I LOVE YOU NOT (1996), THE DEVIL'S OWN (1997), WIDE AWAKE (1998), WICKED (1998), THE BOURNE IDENTITY (2002), THE BOURNE SUPREMACY (2004), THE BOURNE ULTIMATUM (2007). Sementara serial TV yang dibintanginya, GHOSTWRITER (1993-1994), CHICAGO HOPE, BEFORE WOMEN HAD WINGS (1997), THE '60'S (1999).

Perempuan yang memiliki nama panjang Julia O'Hara Stiles ini, dalam perjalanan asmaranya pernah menjalin hubungan dengan aktor Joseph Gordon-Levitt (1981-1999). Dan kemudian berpindah ke hati aktor Joshua Jackson (2000-Sekarang).